乙酰膽堿酯酶（AchE）測(cè)定試劑盒 微量法
測(cè)定意義：AchE屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
測(cè)定原理：AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定412 nm吸光度增加速率，計(jì)算AchE活性。
需要的儀器，耗材：紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
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?乙酰膽堿酯酶（AchE）測(cè)定試劑盒 微量法
微量法
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
貨號(hào)：BC2025
規(guī)格：100 管/96 樣
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1.3mL 試劑二，充分震蕩溶解。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1.3mL 試劑二，充分震蕩溶解。
產(chǎn)品說(shuō)明： AchE 屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE 催化乙酰膽堿（Ach）水 解，在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。 AchE 催化 Ach 水解生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB）作用生成 5-巰基-硝基苯甲 酸（TNB）；TNB 在 412nm 處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定 412nm 吸光度增加速率，計(jì)算 AchE 活性。 自備儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸 餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g4℃離心 10min，取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn) 細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）； 然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
二、測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 412nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 20μL 蒸餾水、 160μL 試劑二、 10μL 試劑三和 10μL 試劑四，迅速混勻，于 412nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化，第 10s 吸光值記為 A1，第 190s 吸光 值記為 A2。△A 空白管=A2－A1 4. 測(cè)定管：取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 20μL 上清、160μL 試劑二、10μL 試劑三和 10μL 試劑四，迅速混勻，于 412nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化，第 10s 吸光值記為 A3，第 190s 吸光 值記為 A4。△A 空白管=A4－A3
注意：空白管只需測(cè)定一次
相關(guān)文獻(xiàn)：
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